पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) परीक्षण आणविक निदान में एक मुख्य तकनीक है। इसकी पैकेजिंग और परीक्षण प्रक्रियाओं का मानकीकरण सीधे परिणामों की सटीकता और जैव सुरक्षा को प्रभावित करता है। यह लेख पीसीआर परीक्षण प्रक्रिया में प्रमुख गुणवत्ता नियंत्रण बिंदुओं पर एक पेशेवर परिप्रेक्ष्य प्रदान करता है।
नमूना रसीद और दिखावा प्रक्रिया में पहला कदम है। प्रयोगशालाओं को नमूना अखंडता सुनिश्चित करने के लिए नमूना पहचान, परिवहन की स्थिति और भंडारण समय को सख्ती से सत्यापित करना चाहिए। प्राप्ति पर, नमूनों को एक बायोसैफ्टी कैबिनेट में गिना और पंजीकृत किया जाना चाहिए और परीक्षण प्रकार के आधार पर प्री -- प्रसंस्करण प्रक्रियाओं जैसे कि लसीका और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण से गुजरना होगा। क्रॉस - संदूषण को रोकने के लिए इस चरण के दौरान एक दो - व्यक्ति सत्यापन प्रणाली की आवश्यकता होती है।
पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी एक साफ बेंच के भीतर की जानी चाहिए। ऑपरेटरों को स्तर 3 सुरक्षात्मक उपकरण पहनना चाहिए और nuclease - मुफ्त उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करना चाहिए। अभिकर्मक तैयारी "यूनिडायरेक्शनल वर्कफ़्लो" सिद्धांत का पालन करती है, अभिकर्मक तैयारी क्षेत्र से नमूना प्रसंस्करण क्षेत्र और फिर प्रवर्धन क्षेत्र में जाती है। प्रयोगात्मक वैधता की निगरानी के लिए नकारात्मक नियंत्रण, सकारात्मक नियंत्रण और आंतरिक नियंत्रण प्रत्येक प्रतिक्रिया बैच में शामिल किए जाने चाहिए।
प्रवर्धन और परीक्षण चरण के दौरान, पीसीआर इंस्ट्रूमेंट को पूर्व - कैलिब्रेटेड और तापमान साइकिलिंग मापदंडों को सत्यापित किया जाना चाहिए। प्रतिक्रिया प्रक्रिया में आमतौर पर तीन चरण शामिल होते हैं: विकृतीकरण (94 - 95 डिग्री), एनीलिंग (50-65 डिग्री), और एक्सटेंशन (72 डिग्री)। चक्रों की संख्या का पता लगाने के लक्ष्य के आधार पर समायोजित किया जाता है। वास्तविक समय प्रतिदीप्ति पीसीआर को भी विशिष्ट चैनलों के प्रतिदीप्ति सिग्नल दहलीज की निगरानी की आवश्यकता होती है।
परिणाम विश्लेषण और रिपोर्टिंग योग्य तकनीशियनों द्वारा किया जाना चाहिए। प्रवर्धन वक्र आकृति विज्ञान, सीटी मूल्य की बहुलता और मानकों के साथ गुणवत्ता नियंत्रण सामग्री के अनुपालन की पुष्टि करने के लिए कम से कम दो पेशेवरों द्वारा कच्चे डेटा की समीक्षा की जानी चाहिए। अंतिम रिपोर्ट में परीक्षण कार्यप्रणाली पर जानकारी, परिणाम व्याख्या के लिए आधार और परीक्षण सीमाओं का एक विवरण शामिल होना चाहिए।
पूरी प्रक्रिया सख्ती से आईएसओ 15189 और प्रासंगिक सीडीसी विनिर्देशों का पालन करती है। पीसीआर परीक्षण की विश्वसनीयता और ट्रेसबिलिटी सुनिश्चित करने के लिए पर्यावरण निगरानी, उपकरण रखरखाव और कार्मिक प्रशिक्षण की एक ट्रिपल गारंटी प्रणाली लागू की जाती है।