पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) प्रयोगों में, पैकेजिंग सरल लग सकती है, लेकिन यह सीधे अभिकर्मक स्थिरता, उपयोग में आसानी और विश्वसनीय परिणामों को प्रभावित करता है। चाहे संग्रहीत और परिवहन प्रयोगशाला - तैयार अभिकर्मकों या वाणिज्यिक प्रीमिक्स, उचित पीसीआर पैकेजिंग तकनीकों में महारत हासिल करना सामान्य त्रुटियों से बच सकता है और प्रयोगात्मक दक्षता में सुधार कर सकता है। नीचे, हम सामग्री चयन, पैकेजिंग रणनीतियों और भंडारण विवरण पर व्यावहारिक सुझाव साझा करते हैं।
I. पैकेजिंग सामग्री चयन: संगतता और सुरक्षा को प्राथमिकता देना
पीसीआर प्रतिक्रियाएं तापमान, प्रकाश और दूषित पदार्थों के प्रति संवेदनशील हैं, इसलिए पैकेजिंग सामग्री को तीन प्रमुख आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए: एयरटाइटनेस, लाइट - प्रूफिंग, और रासायनिक जड़ता।
सेंट्रीफ्यूज ट्यूब और पीसीआर प्लेटों के लिए, पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) को प्राथमिकता दी जाती है, इसकी उच्च पारदर्शिता और डीएनएएसई/आरएनएएसई - नि: शुल्क गुण . 0.2 एमएल पतली - दीवारों के लिए अलग -अलग हैं। 96 - अच्छी तरह से पीसीआर प्लेटों के लिए, हम एक स्कर्ट डिज़ाइन (रोबोट हेरफेर में आसानी के लिए) या एक गैर-स्कर्टेड डिज़ाइन (अंतरिक्ष संरक्षण के लिए) चुनने की सलाह देते हैं।
सीलिंग विधि: पारंपरिक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब फ्लैट या उठाए गए कैप (वाष्पीकरण को रोकने और बाहर सूखने को रोकने के लिए) का उपयोग करते हैं। हालांकि, लंबे समय तक - टर्म स्टोरेज, हीट - सीलिंग फिल्म (जैसे पैराफिल्म) या सांस लेने वाली फिल्म (जैसे एरासियल) को आंतरिक और बाहरी दबाव को संतुलित करने के लिए अनुशंसित किया जाता है। पीसीआर प्लेटों को चिपकने वाले एल्यूमीनियम पन्नी सीलर्स (उच्च - तापमान प्रतिरोधी) या स्व - चिपकने वाली फिल्म (एकल - उपयोग के लिए) का उपयोग करने के लिए अनुशंसित किया जाता है।
प्रकाश सुरक्षा: प्रकाश - संवेदनशील सामग्री (जैसे कुछ रंजक या प्राइमरों) को एल्यूमीनियम पन्नी में लपेटा जाना चाहिए, या काले पीसीआर प्लेटों (कुछ निर्माताओं से उपलब्ध) का उपयोग किया जाना चाहिए।
Ii। एलिकोटिंग तकनीक: बार -बार फ्रीज - पिघलना चक्र से नुकसान को कम करना
एलिकोटिंग अभिकर्मक पीसीआर पैकेजिंग में एक मुख्य कदम है और सीधे प्रयोगात्मक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता को प्रभावित करता है।
मास्टर मिक्स एलिकोटिंग: कमर्शियल मास्टर मिक्स (जैसे कि TAQ एंजाइम और DNTP मिक्स) को रिएक्शन वॉल्यूम के साथ -साथ 5% - 10% मार्जिन (जैसे, 20 μL प्रतिक्रिया के लिए, प्रति ट्यूब 22 μl को विभाजित करने के लिए) की सिफारिश की जाती है। थोक पैकेजिंग से सीधे उपयोग करने से बचें, क्योंकि दोहराया गया फ्रीज - थाव चक्रों से एंजाइम गतिविधि में कमी हो सकती है (TAQ एंजाइम लगभग 5% गतिविधि को फ्रीज-थाव चक्र में खो सकता है)।
प्राइमर और टेम्प्लेट: प्राइमरों (विशेष रूप से कस्टम प्राइमरों) को 100 माइक्रोन स्टॉक समाधानों से अलग होने की सिफारिश की जाती है और - 20 डिग्री पर संग्रहीत किया जाता है। उपयोग से पहले एक काम करने वाली एकाग्रता (आमतौर पर 0.1-1 माइक्रोन) के लिए पतला। जीनोमिक डीएनए जैसे टेम्प्लेट को एकल - में विभाजित किया जाना चाहिए, क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए मात्रा का उपयोग करें।
संदूषण रोकथाम युक्तियाँ: सुनिश्चित करें कि सेंट्रीफ्यूज ट्यूब एलिकोटिंग से पहले सूखे हैं (अवशिष्ट इथेनॉल पीसीआर को रोक सकते हैं), पूर्व - कूल पिपेट टिप्स को ठंडे अभिकर्मकों को दीवार से चिपके रहने से रोकने के लिए, और त्वचा डीएनए संदूषण से बचने के लिए पूरी प्रक्रिया में दस्ताने पहनते हैं।
Iii। लेबलिंग और रिकॉर्डकीपिंग: "ब्लैक बॉक्स" ट्रैप से बचें
पीसीआर पैकेजिंग के लिए स्पष्ट लेबलिंग महत्वपूर्ण है; गलत लेबलिंग पूरे प्रयोग को बर्बाद कर सकती है।
अनिवार्य लेबलिंग जानकारी: अभिकर्मक नाम (जैसे, "2 × TAQ मास्टरमिक्स"), एकाग्रता/सामग्री (जैसे, "10 मिमी DNTPS"), बैच संख्या (ट्रेसबिलिटी के लिए), भंडारण की स्थिति (जैसे, "-20 डिग्री प्रकाश से संरक्षित"), एलिकोट तिथि, और समाप्ति तिथि (जैसे, "6 महीने के भीतर उपयोग करें")।
विशेष लेबलिंग: यदि अभिकर्मक में ग्लिसरॉल (एंटीफ् ester ीज़र), रंजक (जैसे, sybr ग्रीन), या एडिटिव्स (जैसे, बीएसए) शामिल हैं, तो अतिरिक्त जानकारी प्रदान की जानी चाहिए (जैसे, "50% ग्लिसरॉल शामिल हैं, उच्च तापमान पर स्टोर नहीं करते हैं")।
रिकॉर्ड सिंक्रनाइज़ेशन: प्रत्येक ट्यूब की सामग्री (जैसे, प्राइमर अनुक्रम, टीएम वैल्यू) के विस्तृत मापदंडों को रिकॉर्ड करने के लिए स्प्रेडशीट या प्रयोगशाला प्रबंधन सॉफ्टवेयर (जैसे, लैबगुरु) का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है और उन्हें भौतिक लेबल नंबर के साथ संबद्ध किया जाता है।
Iv। भंडारण और परिवहन: तापमान और भौतिक सुरक्षा को संतुलित करना
पीसीआर अभिकर्मकों की स्थिरता भंडारण की स्थिति पर अत्यधिक निर्भर है, और परिवहन के दौरान अतिरिक्त सुरक्षा की आवश्यकता होती है।
सामान्य भंडारण:
एंजाइम (TAQ, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस): लॉन्ग - टर्म स्टोरेज इन - 20 डिग्री (बार -बार फ्रीज -पिघलने वाले चक्रों से बचें; भविष्य के उपयोग के लिए -80 डिग्री पर एलिकोट और स्टोर करें);
प्राइमर/जांच: 1 वर्ष से अधिक के लिए -20 डिग्री पर स्टोर करें (यदि बायोटिन जैसे संशोधित समूह, प्रकाश से सुरक्षित रखें);
गैर - एंजाइम बफ़र्स (जैसे, पीबीएस): शॉर्ट - टर्म स्टोरेज 4 डिग्री (1 महीने तक) पर स्टोरेज।
परिवहन आवश्यकताएँ:
कोल्ड चेन ट्रांसपोर्टेशन के लिए, एंजाइमों के लिए सूखी बर्फ (- 78 डिग्री) का उपयोग करें (-20 डिग्री से नीचे बनाए रखा गया), और अल्पकालिक परिवहन के लिए बफ़र्स के लिए नीली बर्फ (लगभग 0 डिग्री)।
अत्यधिक कंपन (पीसीआर प्लेटों को कुओं के बीच अभिकर्मकों के मिश्रण को रोकने के लिए फोम बॉक्स में सुरक्षित किया जाना चाहिए) से बचें।
उच्च गर्मियों के तापमान के दौरान, पैकेजिंग में एक इन्सुलेट परत जोड़ें (जैसे, एल्यूमीनियम पन्नी इन्सुलेशन बैग + जमे हुए जेल पैक)।
वी। सामान्य समस्याएं और समाधान
समस्या 1: अभिकर्मक वर्षा (जैसे, DNTPS या MGCL, कम तापमान पर वर्षा) → समाधान: संक्षेप में सेंट्रीफ्यूज (1000 आरपीएम, 1 मिनट) से पहले एलिकोटिंग से पहले। उपयोग से पहले 37 डिग्री इनक्यूबेटर में भंग करें और अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए भंवर।
समस्या 2: प्लेट सीलर आसानी से छीलने वाले → समाधान: एक चिपकने वाले बैकिंग के साथ गर्मी - प्रतिरोधी सीलर चुनें, या एक हीट सीलर (उच्च - थ्रूपुट प्रयोगों के लिए उपयुक्त) का उपयोग करें।
समस्या 3: धुंधला लेबल → समाधान: एक वॉटरप्रूफ मार्कर (जैसे कि शार्पी) या लेजर - को लेबल प्रिंट करें, ताकि लिखावट को शराब से मिटाने से रोका जा सके।
निष्कर्ष
पीसीआर पैकेजिंग सिर्फ "पैकेजिंग" अभिकर्मकों से अधिक है; यह प्रयोगात्मक विश्वसनीयता के लिए रक्षा की पहली पंक्ति है। उपयुक्त सामग्रियों का चयन करके, एलिकोटिंग प्रक्रिया को मानकीकृत करके, पूरी तरह से लेबलिंग बनाए रखना, और परिवहन के दौरान सख्त तापमान नियंत्रण को बनाए रखना, आप मानव त्रुटि को काफी कम कर सकते हैं, अधिक स्थिर बाद के प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं और अधिक विश्वसनीय परिणामों को सुनिश्चित कर सकते हैं। याद रखें: विवरण सफलता निर्धारित करते हैं। उचित पीसीआर पैकेजिंग प्रथाएं आपके पूरे प्रयोग में महत्वपूर्ण समय समस्या निवारण बचा सकती हैं!